V. HPLC Troubleshoot [ HPLC 사용시 문제해결방법 ]

0. 서론

1. Leak

2. 압력문제

3. Retention-time 문제 #5-8

4. Baseline noise

5. Baseline Drift

6. Peak Problem

7. Sensivity Problem

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5. Baseline Drift

베이스 라인 상승은 일반적으로 이동상이 방해 받거나 컬럼의 오염증가 또는 온도의 변화에 의해 발생할 수 있다.

(1) 반복적인 baseline drift

크로마토그래피를 실행 중 베이스라인 이동이 반복적으로 나타나면 이동상과 관련된 문제이다.

Gradient 조건에서 베이스 라인의 변화는 실행 중에 종종 발생한다.

특히 낮은 파장의 UV에서는 사용한 다른 용매의 흡수가 다르기 때문에 발생하게 된다.

용매를 선택 시 가능한 흡수도가 유사한 것을 선택하도록 하라.

(2) 랜덤한 baseline drift

베이스라인이 무작위로 이동되는 것이 지속되는 것은 컬럼이 심하게 오염되었기 때문이다.

이런 경우 고농도의 용매로 컬럼에 흘려서 해결한다.

이런 문제가 지속되면 컬럼을 교체하고, HPLC사용과정과 시료준비과정을 재검토한다.

(3) 주기적인 baseline drift

작동 시 베이스라인 이동이 주기적 (cyclic)이라면 크로마토그래피의 분리에 영향을 주는 주변 환경의 온도의 변화 때문이다. 실험실 난방에 변화를 줘서 실험실의 공기상태와 베이스 라인 상승과 피크 갈라짐에 영향을 받는지 알아본다. 이런 문제를 해결하는 가장 효과적인 방법은 컬럼오븐을 사용하여 컬럼의 온도를 자동온도 조절하는 것이다.