1. Column 세척과 수리

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1. Column 세척과 수리

1. 만일 컬럼 장착 후 시스템의 backpressure가 높다면, 컬럼을 분리시킨 후 펌프를 작동하여 압력의 원인이
컬럼인지 HPLC 시스템의 문제인지 알아야 한다. 마찬가지로 이동상이 detector를 통과하지 않게 하면서 같은
방법으로 점검한다.

2. 만약 컬럼의 backpressure가 높다면, 컬럼을 반대로 연결하고 주입 프릿에 있는 오염물을 밀어내기 위해
세척한다. 반대방향 세척을 처음에는 낮은 유속 (내부직경이 4.6mm인 컬럼의 경우 0.5ml/min)으로 15분 가량
흘려준 후 점차적으로 유속을 1.5-2.0ml/min으로 높인다.

3. 컬럼을 강력한 용매 (역상 컬럼의 경우 유기 함량이 높은 용매를, 이온교환 컬럼의 경우 높은 농도의 염을
가진 용매)를 사용하여 10-20배의 컬럼 부피로 세척하거나, 2-3회 샘플 주입 없이 일반적인 gradient로 용출
하게 되면  약하게 결합된 오염물들을 제거할 수 있다.

4. Carbohydrate column의 경우

컬럼에 고농도의 당을 주입하게 되면 당은 고농도의 유기 용매 이동상 (예를 들자면 80% Acetonitrile)과 침전
을 일으킬수 있다. 이러한 당들은 제거되어야 하며, 뜨거운 물 (50-60도)을 사용하여 유속을 1ml/min 이상으
로 하여 30분 동안 역방향으로 흘려줌으로 제거할 수 있다. 그 후 다시 유기 용매를 이용하여 평형상태로
만든다.

5. 만일 역상 컬럼이 단백질이나 폴리펩타이드에 의해 오염되었다고 의심이 든다면, 1ml/min의 유속(내부직
경이 4.6mm인 컬럼의 경우)으로 1% SDS 용액을 500ul 주입한다. 그 후 0.1% (v/v)의 TFA를 포함한
acetonitrile을 10분동안 5-95%까지의 Gradient로 작동시킨다.

6. polymeric 역상 컬럼(214TP, 208TP, 218TP 등)은 1:4의 비율로 섞인 0.1N 질산과 IPA 혼합액으로 
세척한다.  낮은 유속으로 밤새 세척하는 것이 가장 효과적이다.

    NOTE!!!

    질산 세척 방법은 238TP, 238MS, EVEREST, DENALI, GENESIS와 같은

    monomeric 역상 컬럼에 사용하는 것은 권장하지 않는다.

7. 만약 지질이나 소수성의 매우 작은 분자들이 컬럼 성능을 변화시켰다면, 아래 표에 나타낸 것과 같이
MC, Chroloform, Hexane과 같은 더 강력한 용매를 이용하여 순서대로 세척하여 오염물을 제거할 수 있다.

수용성에서 물과 혼화되지 않는 용매로 전환거나 또는 그 반대의 경우, 두 용매에 공통적으로 혼화될 수 있는
중간성질의 용매(예 IPA)를 사용하여 세척하는 것이 중요하다.

용매의 혼화 경향성은 용매 특성표 (Solvent Properties Table)이용한다. 다음 단계로 넘어가기 전 혼화되지
않는 용매에 남아있는 모든 불순물을 제거하기 위해서는, 일반적으로 컬럼 부피의 10-15에 해당하는 양을
흘려주어야 한다.