1. 컬럼 선택시 주의사항

2. 컬럼 사용시 주의사항

3. 용매 사용시 주의사항

4. 샘플 사용시 주의사항

5. Column conditioning

6. 압력과 온도의 조절

7. 성능 테스트

8. 화학적 안정성

9. 추천 Elution 조건

10. 세척제 및 다른 화학제품

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6. 압력과 온도의 조절

Grace Vydac silica HPLC column은 0-60℃의 온도, 최대 5,000psi (335bar)이하의 압력에서 안정하나

보통 HPLC 시스템에서 사용되는 최고 압력 한계는 최대 5,000psi로 설정되어있다.

표준 조건 (5-70% Acetonitrile with Water)에서 Grace Vydac의 silica 역상 컬럼의 Back pressure는 아래와 같다.

7. 성능 테스트

Grace Vydac의 역상 컬럼 Material은 적합한 표준 시료로 테스트 되어진다.

각각의 컬럼은 Resoultion이 테스트 되며, 테스트 조건과 결과는 컬럼에 첨부되어 제공 되어진다.

만약 컬럼의 성능을 확인해 보기를 원한다면, 같이 공급된 설명서에 따라 Resolution  테스트를 반복하기를 권장한다.

8. 화학적 안정성

Grace Vydac 역상 컬럼은 Acetonitrile, Methanol, Ethanol, IPA, MC, Chloroform 등을 포함하는 일반적 유기 용매에 대해 안정하다. 용매를 전환할 때, 이전에 사용하고 있는 이동상이 전환할 용매와 혼화되는지에 알아보는 것이 매우 중요하다. 사용하는 컬럼의 권장 pH 범위에 따라 사용해야 하며 극한의 pH인 경우 특히 권장 범위를 넘어서는 경우는 컬럼의 수명을 단축시킨다.

9. 추천 Elution 조건

Grace Vydac 역상 컬럼은 일반적으로 ion-paring 시약이 있는 조건에서 유기용매를 Gradient하게 증가시킴으로 용출된다. 가장 일반적으로 사용되는 유기용매는 낮은 점성을 가지며, UV 투과도가 높고, 휘발성이 강한 Acetonitrile이며 Methanol, Ethanol, Isopropanol도 역시 자주 사용된다.

TFA는 가장 일반적으로 사용되는 ion-paring 시약이며, 0.05-0.2% (w/v)의 농도로 사용한다.

그러나 VYDAC LC/MS 등급의 컬럼은 0.01%의 낮거나 TFA를 사용하지 않고 다음과 같은 ion-paring 시약을 사용했을 때 훌륭한 분리능을 보여준다.

: 아세트산, 포름산, 헵타플로로부틸산 (염기성 펩타이드 분석), 트리에틸아민 인산 (TEAP), 인산

10. 세척제 및 다른 화학제품

SDS(sodium dodecyl sulfate)와 같은 일반적인 단백질 세정제 (detergent)은 컬럼에 손상을 주지 않고 사용할 수 있으며, Acetonitrile이나 IPA로 컬럼을 세척함으로 제거할 수 있다. 그러나, 이러한 세정제들은 컬럼의 분리능에 영향을 줄 수 있음으로 산화력을 가진 용출액이나 시료 첨가제는 사용하지 않는 것이 좋다.

만약 컬럼이 오염된다면, 컬럼의 특성과 오염물은 컬럼을 재생하기 위한 단계를 결정하는데 도움을 준다.

주입구 프릿에 생성된 불순물 입자들은 back pressure를 증가시킬 수 있다.

컬럼에 매우 강하게 흡착되거나 침전될 수 있는 샘플물질들은 Backpressure의 상승, 성능감소 (피크모양, 분리능)를 발생시킬 수 있다.