< The Effect of Surfactants On Reversed-Phase Separation >

polypeptide 샘플은 종종 surfactant를 포함한다.
RP-HPLC polypeptide 분리와 컬럼 자체에서의 surfactant의 효과를 판별하기 위해서, 다섯가지의 protein
(vibonuclease, insulin, lysozyme, myoglobin, ovalbumin)에 0.5% SDS를 넣을 경우와 넣지않을 경우를 나누어
크로마토그램을 조사해본다.

C18 컬럼에서 protein sample에 SDS를 넣고 분리할 경우, SDS를 넣지 않을 때 보다 결과가 훨씬 좋지 않다.
그러나 동일한 컬럼에서 다시 SDS를 넣지 않고 실험해보면 여전히 좋은 결과를 얻음을 확인할 수 있다.
이는 gradient에서 SDS가 제거되었으며, column이나 그 이후의 분리에 영향을 주지 않았음을
확인해준다.

C4 column에서는 C18보다 조금 더 결과가 좋다. C4 컬럼으로 분리할 경우, protein sample에 SDS가
있으면 chromatography에 영향을 주지만 C18에서보다는 영향이 적다. 또한 C18의 경우와 마찬가지로 SDS를 제거한
후에도 그 이후의 분리에 영향을 주지 않았음을 알 수 있다.

peptide분리는 surfactant의 유무에 따라 크게 영향을 받는다. 심지어 소량의 SDS가 protein sample이나 protein
digest에 있다해도, 분리능의 심각한 저하를 가져온다. protein digest의 peptide map은 소량의 SDS를 포함한다하더라도
digest 분리에 영향을 주며 그 양이 커지면 resolution이 파괴된다.
비록 surfactant가 일반적으로 RP-HPLC peptide분리를 저하시킨다할지라도 eluent에 octylglucoside, urea,
guanideine을 사용하는 것은 몇몇 경우에서 이로운 결과를 가져온다.

dydirgkaus, surfactant는 보통 RP-HPLC polypeptide의 분리를 저하시키지만, 사용한다고해서 컬럼을 손상시키는
것은 아니다. 만일 sample에 surfactant가 현존해 있다면, C4 RP column을 사용하거나, 크로마토그래피 이전에
surfactant를 제거해주길 권장한다.