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HPLC 컬럼 /기기 관련 자주 묻는 질문들
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작성자 :
충인과학
Date : 2015-07-28 17:01 | Hit : 970
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1. Q. Theoretical plates(이론단수, 컬럼효율) 이 낮아지는 원인은?
A. 몇가지 요인이 있다. 우선적인 요인은 컬럼내 공간이 생기는 경우이다. 이 경우에
컬럼의 packing material과 유사한 material 로 충진하거나, 컬럼을 교체하는 것이 좋다.
컬럼 볼륨이 너무 크거나 주입된 샘플 양이 너무 많은 경우, Sample solvent의 세기가 이동상보다 큰 경우, 이동상의 조성 변화 등이 컬럼 효율을 떨어뜨리는 요인이 될 수 있다.
2. Q. 이론단수와 컬럼의 particle size, 길이의 연관성은?
A. 일반적으로, 컬럼의 길이가 일정할 때 particle size가 반으로 줄면 이론단수는 두 배로 증가하며,
back pressure는 4배가 된다.
반면, 컬럼의 길이가 두 배로 길어지면 분석시간과 이론단수도 두 배로 증가한다.
back pressure 역시 두 배로 커진다.
3. Q. 컬럼 ID의 변화가 분리에 미치는 영향은?
A. 컬럼의 직경과 피크의 sensitivity는 반비례 관계이다.
가령, 컬럼의 직경을 기존 사용하던 것보다 반으로 줄일 경우 peak 의 높이가
5배 정도 높아진다.
4. Q. HPLC로 분석 가능한 물질에는 어떤 것들이 있나?
A. 매우 광범위하나, 대표적인 분야는 다음과 같다.
- 음식물이나 수질에서의 잔류 농약 검출
- 해양 생물의 색소 분리
- 화합물의 합성에서의 생성물 확인 및 분리
- 아미노산 분석
- Poly Aromatic Hydrocarbon의 분석
- 단백질의 분리 및 정제
- 음용수에 잔류하는 페놀류 분석
- 약물이나 음료의 성분 분석 등.
5. Q. HPLC를 가동하기 전에 확인해야 할 사항들은?
A. 확인 사항은 아주 많다. 사용하는 용매 상태 및 degassing 정도, 시스템 내의
air bubble 점검, 컬럼 연결 후 압력이 안정한지 점검, 검출기의 baseline 안정 등
6. Q. Gradient 조건에서 Bubble 발생시 분석에 미치는 영향 및 해결 방안은?
A. 화학적으로 두 가지 용매 이상이 혼합될 때 혼합열에 의해 각각의 용매에 녹아
있던 공기가 bubble로 발생하게 됩니다.
이러한 bubble은 분석 결과에 큰 오차를 발생시킵니다.
Gradient(둘 이상의 용매 사용조건)시 degassing 방법으로는 He sparging, sonication,
membrain filtration, 진공으로 용매에 녹은 공기를 빼 내는 방법 등이 있다.
7. Q. flowcell 에 공기가 들어가지 않도록 하려면?
A. 상기에 언급된 Solvent degassing 방법을 사용한다. 만약 이미 flowcell 내에
공기가 있고, 잘 빠지지 않는다면 컬럼을 분리하여 Detector를 직접 펌프에 연결한 후
사용하고 있는 용매를 baseline이 안정될 때까지 빠른 속도로 흘려준다.
8. Q. system의 압력이 한계까지 올라가면 어떻게 해야하나?
A. 시스템 내부 어디엔가가 막혀 있을 가능성이 높다. detector를 분리하고 펌프를 가동해본다. 문제가 해결되면 detector 내부의 어딘가가 막혀 있는 것이다.
detector를 분리해도 문제가 해결되지 않는다면, 컬럼을 분리하고 펌프를 가동해본다.
문제가 해결된다면, 컬럼에 문제가 있는 것인데, 주로 미세입자로 인해 컬럼이 막혀있는 경우이다. 이러한 경우에는 컬럼을 거꾸로 연결하고 고압으로 펌프를 가동하여 컬럼을 세척하거나, 컬럼을 교환해 주어야 한다.
컬럼에도 문제가 없다면, injector를 확인해본다. 여기까지도 문제가 해결되지 않는다면
purge valve를 연 상태에서 펌프를 가동한다. 밸브를 연 상태에서 고압이 걸렸을 때와 같은 소리가 난다면 outlet check valve를 교환해 본다. 문제가 해결되지 않으면 system을 구입한 가까운 대리점에 연락한다.
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