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** General guide to Vydac Column Care and Use **
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작성자 :
충인과학
Date : 2015-07-28 16:58 | Hit : 659
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< General Guide to Vydac Column Care and Use >
* Connection Protection *
컬럼의 사용기간을 연장시키기 위하여 solvent delivery system과 injector 사이에 eluent filter를 사용할 것을 권장한다. (Vydac C/N, EF-4) 만일 샘플이 컬럼을 막히게 할 수도 있는 insoluble or strongly adsorded material이라면, Vydac High performance guard column을 사용하길 권장한다.
* Pressure and Temperature Limits *
Vydac silica-based HPLC column은 0∼60℃에서 안정하며, 5000psi(335bar)까지 안정하다. HPLC system은 최대 5000psi(335bar)로 사용 가능하다. Vydac 259VHP polymer Revered-Phase column은 0∼80℃까지 견디나, 제한 압력은 3000psi(200bar)이다.
Vydac silica-based HPLC column의 back-pressure는 보통 아래와 같다.
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column size particle size flow rate back-pressure range
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2.1 x 250mm 5um 0.2mL/min 1000-2000psi
4.6 x 250mm 5um 1.0mL/min 1000-2000psi
4.6 x 150mm 5um 1.0mL/min 600-1400psi
10 x 250mm 5um 5.0mL/min 1000-2000psi
4.6 x 250mm 10um 1.0mL/min 500-1200psi
1.0 x 250mm 10um 5.0mL/min 500-1200psi
22 x 250mm 10um 25mL/min 500-1200psi
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* If you have a problem with a Vydac column *
Vydac HPLC column은 강하게 흡착된 샘플 성분으로 오염되어 back pressure를 발생시키거나, resolution이 감소되는 경우가 있다.
◆ back-pressure가 높다면, injector에서 컬럼을 떼어낸 후 back pressure가 컬럼
때문인지, HPLC system 때문인지 보기 위하여 pump를 흘려 본다.
◆ 컬럼의 back pressure가 높은 것이라면, inlet frit에서 오염물이 빠져 나오도록 컬럼을 뒤집어서 세척해 준다. 역세척은 0.5mL/min(4.6mmID) flow rate로 시작하여 10∼15분 간 흘려주고, 1.5∼2.0mL/min으로 flow를 증가시킨다.
(4.6mmID column : 1.0∼1.5mL/min for polymer column)
◆ 컬럼 10-20배 volume으로 strong eluent해주거나, (Reversed-phase column은 high
organic solvent, ionic exchange column은 high salt로) 오염물이 강하게 흡착되는
것을 막기위해 샘플 주입 없이 2-3 "blank" gradient를 일반적인 흐름으로 걸어준다.
- 만일 위와 같은 방법들이 소용 없다면, 켤럼의 종류별로 제시된 방법들을 써보길 바란다.
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