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‘이동상 flow rate’ 의 영향

작성자 : 충인과학

Date : 2015-07-28 16:57 | Hit : 688

<  RP-HPLC를 이용한 polypeptides분리에 있어 ‘이동상 flow rate’ 의 영향  >

flow rate는 폴리펩타이드 분리에 거의 영향을 미치지 않는다. 역상 표면으로부터의 폴리펩타이드 흡수와 이에 뒤따르는 분리능이 flow rate의 영향을 받지 않기 때문이다.
폴리펩타이드 흡수는 정밀한 organic modifier 농도 차이의 결과이므로 protein resolution은 상대적으로 이동상의 flow rate의 영향을 받지 않는 것이다.
그러나, 작은 펩타이드의 resolution은 eluent flow rate에 영향을 받을 수가 있다. 왜냐하면 RP-HPLC column에서 펩타이드의 행동은 protein과 작은 분자들 사이에 있기 때문이다.
분석용 HPLC 컬럼에서 116 fragment가 0.8ml/min 에서 되는 것에 비해, 80 이하의 peptide fragment는 0.2ml/min flow rate에서 분해된다. 0.5ml/min-1.0ml/min의 flow rate는 분해되는 peptide fragment의 수에 작은 차이를 가져온다. Resolution이 제한된 상태에서 small peptide를 분리 정제할 때에는 작은 flow rate의 변화를 통해 resolution을 향상시킬 수 있음을 주목해야 한다.  Flow rate는 또한 다음과 같은 다른 점들에 영향을 주기도 한다.

* Detection sensitivity *

Low flow rate로 분리할 경우, solvent 양이 적을 때 흡수와 선별성이 증가한다.
Narrowbore HPLC column이 검출 선별성이 뛰어난 주요 이유는 low flow rate로 흘려주고, 폴리펩타이드가 solvent의 작은 양에서 용리되기 때문이다.

* Sample solubility *

비록 정제된 샘플로부터 solvent를 제거 시키는 양을 증가시킨다 할지라고 높은 flow rate는 소수성 폴리펩타이드의 용해도를 증가시킬 수 있다.

* Column back-pressure *

column back-pressure는 flow rate와 직접적인 관련이 있다. Flow rate가 높아질수록 column back-pressure가 높아진다.

* Gradient *

flow rate의 변화는 하드웨어의 구조에 의존하면서 gradient 경사도와 모양에 미묘하게 영향을 준다. 폴리펩타이드 분리가 gradient 조건에 민감하기 때문에 flow rate를 조절하여,  gradient shape에 영향을 미침으로서 resolution을 변화시킬 수가 있다.